[基本原则]

细胞膜上有分支糖包被,细胞之间的关系、细胞的生长分化、免疫反应、肿瘤的发生都与细胞表面的分支糖分子有关。凝集素是一种含有糖,能特异性结合糖分子的蛋白质。它能凝集细胞,刺激细胞分裂。凝集素使细胞凝集,因为它与细胞表面的糖分子连接,并在细胞表面之间形成“桥梁”。加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞凝集。

细胞膜是细胞与外界环境进行物质交换的结构。有些物质可以选择性地让细胞进出,各种物质进出细胞的方式是不同的。水是生物界最常见的溶剂,水分子可以根据物质的浓度梯度从渗透压低的一侧向渗透压高的一侧扩散,这样在高渗环境下,动物细胞就会失水收缩;在低渗环境中,动物细胞会随着水膨胀,直到破裂。

在这个实验中,红细胞被置于各种等渗溶液中。由于红细胞膜对不同溶质的通透性不同,不同溶质渗透进细胞的速度差异很大,有些溶质甚至渗透不进细胞。当溶质分子进入细胞时,可引起渗透压升高,水分子立即进入细胞,使细胞膨胀。当细胞膨胀到一定程度,红细胞膜就会破裂,血红素就会溢出。此时,原本不透明的红细胞悬液突然变成红色透明的血红蛋白溶液,这种现象称为红细胞溶血。由于各种溶质进入细胞的速度不同,不同溶质诱导红细胞溶血的时间也不同。相反,细胞膜对各种物质的渗透性可以通过测量溶血时间来估计。

[方法步骤]

1.马铃薯凝集素溶液和红细胞悬液的制备,无血清鸡红细胞悬液的制备,将凝集素溶液和红细胞悬液混合,静置,在光学显微镜(低倍)下观察凝集素引起的红细胞凝集现象。(PBS缓冲液加2%血细胞作为对照实验)【马铃薯凝集素的制备:称取2g去皮马铃薯块茎,加入10 mL PBS缓冲液,浸泡2h(提取的粗提液中含有可溶性马铃薯凝集素),在载玻片上滴一滴马铃薯凝集素,再滴一滴2%红细胞溶液,充分混合后静置20 min,在低倍显微镜下观察血细胞凝集现象。]

2.观察10%鸡红细胞悬液,可见悬液为不透明的红色液体。

3.观察溶血。取一支试管,加入4ml蒸馏水和0.4ml鸡红细胞悬液。混合后,注意溶液的颜色变化。可以看到溶液由不透明的红色变成透明的红色液体(可以把试管贴在书上,通过试管读书上的字。如果发现溶血,可以清楚的看到字)。

4.观察鸡红细胞对不同物质的渗透性

(1)取试管和4ml 0.17m Nacl溶液,加入0.4ml鸡红细胞悬液,轻轻摇匀,用上述方法观察是否发生溶血。如果发生溶血,记下溶血所需的时间(从加入4ml溶液开始计算)。

(2)根据上述方法,分别加入以下9种溶液是否会引起红细胞溶血,记录实验结果。

① 0.17M氯化铵② 0.17M硝酸钠③ 0.17M硫酸钠④ 0.17M醋酸胺

⑤ 0.17M草酸铵⑥ 0.17M葡萄糖⑥ 0.17m甘油⑧ 0.17M乙醇

⑨0.17m丙酮

[实验结果]

1.马铃薯凝集素能凝集鸡红细胞,PBS对照液中的红细胞分散均匀。对照组不凝固,实验组凝固。

2.氯化钠、硝酸钠和硫酸钠溶液不溶。醋酸铵>草酸铵>氯化铵>乙醇>甘油>丙酮>葡萄糖。膜的通透性主要取决于分子大小和分子极性。小分子比大分子更容易通过,非极性比极性更容易通过,带电离子渗透性很强。

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